Estudo sobre a ocorrência de fungos e aflatoxina B1 na dieta de bovinos leiteiros em São Paulo / Study on the occurrence of fungi and aflatoxina B1 in the diet of dairy cattle in São Paulo, Brazil

A qualidade da dieta ofertada às vacas em lactação é uma preocupação dos agentes de saúde devido à possibilidade da detecção de micotoxinas prejudiciais a saúde humana e animal. Os objetivos do trabalho foram avaliar o perfil da micobiota, determinar a atividade de água (Aa) e a ocorrência natural de aflatoxina B1 (AFB1) em dietas ofertadas a vacas em lactação de fazendas leiteiras no estado de São Paulo, Brasil. As amostragens das dietas foram realizadas diretamente dos cochos de lote de 15 vacas, em dois dias consecutivos com intervalos de 24h e a cada 15 dias, perfazendo um período de 45 dias de amostragens por fazenda. A purificação e determinação de AFB1 foram realizadas em colunas de imunoafinidade e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). O estudo da micobiota presente nas amostras das dietas (288) revelou que as leveduras foram predominantes em todas as dietas (83,97 a 99,98%). Foram isolados 15 gêneros de fungos filamentosos, com os gêneros Aspergillus spp (20,09%), Fusarium spp (14,16%) e Penicillium spp (11,48%) os mais prevalentes. As contagens de Unidades Formadoras de Colônias por grama de alimento (UFC. g-1) variaram de 102 a 1011. A atividade de água das amostras variou entre 0,91 a 0,98. Foi detectada a presença de AFB1 em 31,44% das amostras com teores entre 1,68 a 194,51μg.kg-1. Medidas de boas práticas de produção, estocagem e utilização devem ser tomadas para diminuir a ocorrência de AFB1 nas dietas ofertadas às vacas em lactação...

The quality of the diet offered to lactating cows is a concern to health officials the possibility of detecting mycotoxins harmful to human and animal health. The objectives were to evaluate the profile of mycoflora, determine the water activity (Aw) and the natural occurrence of aflatoxin B1 (AFB1) in diets offered to lactating cows from dairy farms in the state of São Paulo, Brazil. Samples of the diets were taken directly from the troughs batch of 15 cows, on two consecutive days at intervals of 24 hours and every 15 days with a period of 45 sampling days per farm. Purification and determination of AFB1 were performed on immunoaffinity columns and High Performance Liquid Chromatography (HPLC). The study of mycobiota present in samples of diets (288) revealed that yeast cells were predominant in all diets (83.97 to 99.98%). 15 genera were isolated from filamentous fungi, with Aspergillus spp (20.09%), Fusarium spp. (14.16%) and Penicillium spp. (11.48%) the most prevalent. The counts of colony forming units per gram of food (UFC.g-1) ranged from 102 a1011. The water activity of the samples ranged from 0.91 to 0.98. We have detected the presence of AFB1 in 31.44% of samples with levels between 1.68 a 194.51μg.kg-1. Measures of good production, storage and use should be taken to reduce the occurrence of aflatoxin B1 in the diet offered to lactating cow...

Chromatographic methods for biogenic amines determination in foods of animal origin / Métodos cromatográficos para determinar aminas biogênicasem alimentos de origem animal

Biogenic amines (BAs) are formed as a result of specific free amino acid decarboxylation. Analysis of these metabolitesmay be of great importance to determine food quality and for monitoring the levels of biogenic amines such as histamineand tyramine related to intoxication episodes in humans. Chromatography is a chemistry separation technique usedto characterize biogenic amines in foods. Variations of this technique (liquid, thin layer and gas chromatography)have been widely applied; however, the food matrix complex requires that changes in the methodology of extraction,derivatization and detection must be performed according to each group of foods. High-performance liquidchromatography is the most widely used chromatographic method applied for biogenic amines in foods. However, dueto the current importance of biogenic amines in quality control and consumer safety, researchers try to develop newmethods for a fast, reliable analysis of foods in the market. This review presents some chromatographic techniquesapplied to monitoring BAs in different foods of animal origin...

Aminas biogênicas são formadas como resultado da descarboxilação de aminoácidos livres específicos. A análise dessesmetabólitos é de grande importância na determinação da qualidade e monitoramento de biogênicas como histamina etiramina relacionadas com episódios de intoxicação em humanos. A cromatografia é uma técnica de separação químicausada para caracterizar aminas biogênicas. Variações da técnica (cromatografia líquida, em camada delgada e gasosa)têm sido amplamente usadas, porém a complexidade da matriz alimentar faz com que sejam realizadas mudanças nosprocessos de extração, derivatização e detecção em concordância com cada grupo de alimento. A cromatografia líquidade alta eficiência (CLAE) é o método mais utilizado na determinação de aminas biogênicas em alimentos. Contudo,devido à importância das aminas biogênicas no controle da qualidade e a segurança do consumidor, os pesquisadorestentam desenvolver novos métodos com o intuito de uma análise mais rápida e precisa para o controle de alimentos nomercado. O objetivo da revisão é apresentar algumas técnicas cromatográficas aplicadas no monitoramento de aminasbiogênicas em produtos de origem animal...

Development of a monoclonal antibody-based co-agglutination test to detect enterotoxigenic Escherichia coli isolated from diarrheic neonatal calves

Escherichia coli (E. coli) strains were collected from young diarrheic calves in farms and field. Strains that expressed the K99 (F5) antigen were identified by agglutination tests using reference antibodies to K99 antigen and electron microscopy. The K99 antigen from a selected field strain (SAR-14) was heat-extracted and fractionated on a Sepharose CL-4B column. Further purification was carried out by sodium deoxycholate treatment and/or ion-exchange chromatography. Monoclonal antibodies to purified K99 antigen were produced by the hybridoma technique, and a specific clone, NEK99-5.6.12, was selected for propagation in tissue culture. The antibodies, thus obtained, were affinity-purified, characterized and coated onto Giemsastained Cowan-I strain of Staphylococcus aureus (S. aureus). The antibody-coated S. aureus were used in a coagglutination test to detect K99+ E. coli isolated from feces of diarrheic calves. The specificity of the test was validated against reference monoclonal antibodies used in co-agglutination tests, as well as in ELISA. Specificity of the monoclonal antibodies was also tested against various Gram negative bacteria. The developed antibodies specifically detected purified K99 antigen in immunoblots, as well as K99+ E. coli in ELISA and co-agglutination tests. The co-agglutination test was specific and convenient for large-scale screening of K99+ E. coli isolates.